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Nuevos test de ensayo de amplificación de desplazamiento cruzado múltiple (MCDA-LFB) para la detección clínica de Legionella pneumophila

Nuevos test de ensayo de amplificación de desplazamiento cruzado múltiple (MCDA-LFB) para la detección clínica de Legionella pneumophila

Imagen: Tiempo de reacción optimizado para el ensayo de amplificación de desplazamiento cruzado múltiple (MCDA-LFB) para la detección de Legionella pneumophila. La mejor sensibilidad se observó cuando la amplificación duró 35 minutos (Fotografía cortesía del Hospital Popular Provincial de Zhejiang)

Para la detección de Legionella se han desarrollado y utilizado métodos de diagnóstico, incluidos métodos tradicionales de cultivo bacteriano, pruebas serológicas, detección de antígenos en orina y técnicas de amplificación de ácidos nucleicos.
Los especialistas en medicina respiratoria del Hospital Popular Provincial de Zhejiang (Hangzhou; República Popular de China), desarrollaron una nueva técnica isotérmica de amplificación de ácidos nucleicos, la amplificación por desplazamiento cruzado múltiple (MCDA), utilizada para detectar muchos agentes bacterianos, junto con un biosensor de flujo lateral basado en nanopartículas (MCDA-LFB) para la detección rápida de L. pneumophila.
En este ensayo se utilizaron un total de 40 cepas bacterianas, incluidas 24 cepas de L. pneumophila y 16 cepas no L. pneumophila. El equipo utilizó el método de cultivo bacteriano tradicional, la detección por PCR convencional y el método MCDA-LFB para analizar 88 muestras sospechosas de L. pneumophila. Se diseñó un conjunto de 10 cebadores basados en el gen mip específico de L. pneumophila para identificar específicamente 10 regiones objetivas de secuencia diferentes de L. pneumophila.

El tiempo y temperatura óptimos para la amplificación son 57 minutos y 65 °C. El límite de detección (LD) es 10 fg en cultivos puros de L. pneumophila. No se obtuvo reacción cruzada y la especificidad del ensayo MCDA-LFB fue del 100%.
El proceso completo del ensayo, incluidos 20 minutos de preparación de ADN, 35 minutos de reacción de L. pneumophila-MCDA y 2 minutos de reacción de la tira detectora, se demoró menos de 1 hora.
Entre 88 muestras para evaluación clínica, cinco (5,68 %) muestras dieron positivo para L. pneumophila mediante MCDA-LFB y el método de cultivo tradicional, mientras que cuatro (4,55 %) dieron positivo para L. pneumophila mediante el método PCR dirigido al gen mip. En comparación con el método de cultivo, la exactitud diagnóstica del método MCDA-LFB fue mayor.
Los autores concluyeron que el método L. pneumophila-MCDA-LFB que desarrollaron con éxito es una herramienta de diagnóstico simple, rápida, confiable y sensible, que se puede usar ampliamente para la identificación de L. pneumophila en laboratorios básicos y clínicos. El estudio fue publicado el 8 de enero de 2022 en la revista BMC Microbiology.
Fuente: Labmédica.

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